肿瘤微环境蛋白标志物怎么选？

肿瘤微环境想染多色免疫荧光，得到一张绚丽多彩的荧光图，奈何不清楚指标该怎么选，小编给您做参考！

什么是肿瘤微环境？
肿瘤微环境通常是指肿瘤发生、生长及转移与肿瘤细胞所处的内外环境。肿瘤微环境包括了肿瘤所在组织的结构、功能和代谢等部分，深入了解肿瘤微环境中复杂的组分和功能对于肿瘤预防和治疗都有十分重要的临床意义。

肿瘤微环境由哪些细胞组成呢？
肿瘤微环境主要有肿瘤细胞、及其周围各类免疫细胞（T细胞、B细胞、肿瘤相关巨噬细胞）、肿瘤相关成纤维细胞、微血管、附近间质以及各种细胞因子和趋化因子等构成，某些细胞或蛋白功能都是相互作用的，相互促进或相互抑制在不同的环境下所发挥的功能都有可能不同，这个也是需要科研工作者持续研究的内容，如何将多个所关注的细胞类型、蛋白类型能够在一张玻片上展现出来，这个就需要严谨的实验设计和选择合适的实验方法。

不同细胞的标志物怎么选？
首先确定要观察的几种细胞类型，再次挑选能特异性标记的Maker，有些蛋白只特定的在某一种细胞上表达，那就可以用单一的蛋白Maker去标记，而有些蛋白可能在多种细胞上表达，这个就需要用2种或者2种以上的蛋白Maker精确定位。再有确定的Maker尽量选择口碑不错的抗体厂家及货号，以便后续染出来的荧光图表达特异更加美观。

常见细胞标记物：

1.肿瘤细胞：绝大多数肿瘤都是上皮来源，比如肠胃癌、肺癌、肝癌、宫颈癌等等都属于上皮来源，这类肿瘤组织一般用pan-ck（广谱角蛋白）或EPCAM（上皮细胞粘附分子）标记。

2.免疫细胞：包括巨噬细胞、T 细胞、B 细胞、自然杀伤细胞（NKCells）和肿瘤相关中性粒细胞 （TANCells）等，参与肿瘤免疫反应，影响肿瘤微环境，调控肿瘤生长、转移。

T细胞：又称为T淋巴细胞，T淋巴细胞主要是行使细胞免疫的功能，是身体内抵御疾病、感染和肿瘤形成的英勇斗士，它们功能的正常与否对人类抵御疾病非常重要。T细胞膜表面分子与T细胞的功能相关，也是T细胞的表面标志，可以用以分离、鉴定不同亚群的T细胞。
CD3:通用T细胞标志物
CD8+T细胞（细胞毒性T细胞）
CD4+T细胞（调节辅助性T细胞）
Foxp3 Treg--调节型T细胞

White-foxp3,green-CD8,RED-CD4

B细胞：当机体受到病原体的侵入时，机体的免疫系统激活，T淋巴细胞会释放淋巴因子，传递给B淋巴细胞，诱导B细胞分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体，主要执行机体的体液免疫。，
常见标记物：CD19\CD20\CD21

巨噬细胞：巨噬细胞是机体内促进炎症反应的关键细胞之一，但不是所有巨噬细胞都促炎(M1)，偏偏就有些巨噬细胞会唱反调抑制炎症(M2).
CD68(泛指所有巨噬细胞)
CD80\iNOS（M1型巨噬细胞）
CD206\CD204\CD163（M2型巨噬细胞）

Green-CD68,RED-CD204,YELLOW-CD163

NK细胞 即自然杀伤细胞，是一类固有淋巴样细胞，无需抗原预先致敏，就能自发地杀伤靶细胞，故名自然杀伤细胞。
常见标志物：CD16、CD56、CD57、CD59、CD11b、CD94

3.常见免疫靶点：PD-1\PD-L1\CTLA-4\TIM3\LAG3

4.肿瘤血管内皮细胞：肿瘤血管内皮细胞受到肿瘤细胞分泌的多种细胞因子及信号通路的调控。它不仅为肿瘤提供生长所需的氧气和营养，也为肿瘤转移提供了途径。
常见标志物：CD31、CD146、CD105

5.肿瘤成纤维细胞：癌症相关成纤维细胞 (CAF) 通常被认为是在肿瘤组织内部和周围发现的所有成纤维细胞，它们由正常驻留组织成纤维细胞激活或从非成纤维细胞转分化而来。
常见标志物：α-SMA、FAP、Vimentin、S100A4

6.其他：基于组学筛选或者是老师们已有的研究结果，挑选一些差异性大或自己感兴趣的蛋白，组合在一起染色组织原位上展示各蛋白的定性、定量及空间位置关系分布，结合临床数据，对不同肿瘤亚型、不同治疗方案、不同实验因素干预的预后判断、治疗效果评价、免疫应答水平差异解析等场景进行深度解析。