mIHC多色免疫荧光染色一抗怎么选？

MultiplexIHC，简称mIHC也就是大家熟知的以TSA酪胺信号放大系统为技术原理的多色免疫荧光，一抗种属来源不受限制，可选择性很多，但还是有老师对抗体选择有疑问，我之前做WB剩余的抗体可以染免疫荧光吗？我之前做过IHC的抗体可以染免疫荧光吗？您是否也遇到相同的问题，实验室已经有某个抗体虽然说明书没有明确适用于其他实验，都是同一个蛋白的抗体还是想尝试下？今天小编带您来梳理下：

常见特异性抗体染色类型及样本类型

不管mIHC（多色免疫荧光）、IHC-P（石蜡切片免疫组化）、IHC-Fr（冰冻切片免疫组化）、ICC（免疫细胞化学）、IF（免疫荧光）都是组织原位观察各蛋白标志物的表达水平，主要适用：石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、涂片等有些抗体可通用。

其他： FC（细胞流式）、WB（蛋白质印迹）、IP（免疫沉淀）、elisa（酶联免疫吸附实验）解离细胞或把组织匀浆检测特异性蛋白的表达水平不一定适用于mIHC染色，需要具体测试。

mIHC染色及样本类型：

mIHC染色方式为多轮依次染色，原理同IHC染色的两步法，同适用于石蜡切片和冰冻切片，因染色步骤比较繁琐，需要预实验方案构建，冰冻切片容易脱片及形态欠佳。但对石蜡切片非常友好，不管是单个的组织蜡块还是TMA组织芯片，对于回顾性样本研究具有先天的优势，除特殊组织如骨头石蜡切片使用粘附性好的玻片都可以实现在一张玻片上染3-8个靶标蛋白。

mIHC一抗选择：

一抗无需任何偶联物（unconjugated）；一抗无需任何标记，再连接通用HRP标记的二抗就可以，连接荧光基团显色，使用合适的荧光通道成像即可。

样本种属：选择明确适用物种相同的抗体。

实验类型：一般选抗体说明书列有IHC-P或mIHC即可。

抗体宿主选择：尽可能选择与样本不同物种的一抗，避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。

优选单克隆抗体：尽量选择知名厂家文献及评论都比较多稳定的单克隆抗体，染色结果背景干净。

免疫球蛋白类型：一般都是IgG（各亚型皆可）类型的一抗，匹配IgG二抗。

适用于IHC-P的组化及荧光测试

mIHC染色展示